今天是2020年10月15日 星期四,欢迎光临本站 

相关文献

Circular RNA cSMARCA5 inhibits growth and metastasis in hepatocellular carcinoma

文字:[大][中][小] 2018/11/8     浏览次数:    

Circular RNA cSMARCA5 inhibits growth and metastasis in hepatocellular carcinoma

环状RNA cSMARCA5抑制肝细胞癌的生长和转移

 

    期刊:J. Hepatol.;影响因子: 14.911

    发表单位:第二军医大学

 


导 读

 

    cSMARCA5通过miR-17-3p/miR-181b-5p-TIMP3通路抑制HCC的生长和转移

 


摘 要

 

    体内和体外数据表明cSMARCA5抑制HCC细胞的增殖和迁移。从机理上讲,cSMARCA5可以通过海绵吸附miR-17-3pmiR-181b-5p促进TIMP3(一种众所周知的肿瘤抑制因子)的表达。

 


背景介绍

 

    肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一过去的三十年中,英国的HCC发病率翻了一番,在美国翻了三倍。很大程度上是因为转移的倾向,5HCC患者的存活率仍然很低,每年约有600,000HCC患者死亡。确定转移性HCC的预后生物标志物和治疗靶点至关重要。

 


结 果


1   通过RNA-seq在人类肝脏样本中鉴定环状RNA

    我们首先使用RNA-seq分析HCC组织和癌旁组织的RNA。共检测到13,686个不同的circRNA排除低丰度后,鉴定了4727circRNA。其中4214circRNA包含circBase,其他513个是新的(图1A)。此外,4142circRNAs由来自2322个基因的蛋白质编码外显子组成(图1B),并且大多数外显子circRNA的长度小于1,000个核苷酸(图1C)。对比HCC文库及ANL文库可知236个差异表达的circRNA中,在HCC108个被上调128个被下调(图1D。通过qRT-PCR检测部分circRNA40HCCANL组织中的表达(图1ERNA-seq结果一致。


2   cSMARCA5HCC中的表征

    选择cSMARCA5用于进一步研究,因为它是差异表达的最丰富的circRNA之一,其HCC中显著下调,但其pre-mRNAmRNA蛋白水平上调,表明cSMARCA5HCC中的较低表达不仅仅是剪接的副产物并且暗示了功能性已证明在肿瘤细胞转移性传播的早期具有至关重要的意义。通过逆转录实验证明cSMARCA5没有poly-A。此外,cSMARCA5RNaseR具有抗性。半衰期测量证明cSMARCA5mSMARCA5更稳定qRT-PCR和荧光原位杂交(FISH)显示cSMARCA5的主要细胞质分布

 


3   可通过DHX9调节cSMARCA5HCC中的表达

    构建cSMARCA5野生型载体及两端片段截断载体,发现只有野生型载体能高表达cSMARCA5,这说明了I14RCI16RCcSMARCA5的产生是不可或缺。对RNA结合蛋白相关基因进行敲除发现,在敲除DHX9后,cSMARCA5明显上调,而pSMARCA5mSMARCA5没有显示出显著变化,并且这种效应可以通过过表达野生型DHX9转基因而不是'解旋酶死'突变体来挽救,表明调节依赖于其解旋酶活性。使用针对DHX9的抗体进行了RNA免疫沉淀(RIP),并观察到I14RCI16RC的显著富集。此外,DHX9HCC中明显上调并在HCC组织中与cSMARCA5的表达负相关

 


4   下调的cSMARCA5表达预测肝切除术后HCC患者的侵袭性临床病理特征和预后不良

    Kaplan-Meier的存活曲线显示,肝癌切除术后肝癌患者cSMARCA5表达较低的HCC患者总体具有较低的生存率(OS无复发生存率(RFS。多变量分析表明cSMARCA5表达水平,连同AFP,肿瘤大小,病理性卫星,封装,是OS的独立危险因素,cSMARCA5表达水平,与AFP,肿瘤大小,微血管入侵,封装,是RFS的独立危险因素。

 


5   cSMARCA5在体外和体内抑制HCC生长和转移

    CCK-8测定,划痕伤口愈合和transwell迁移测定显示过表达cSMARCA5HCC细胞的生长和迁移显著延迟。敲低cSMARCA5促进了HCC细胞的生长和迁移。在体内,裸鼠皮下注射cSMARCA5过表达细胞显示肿瘤的生长被显著抑制。皮下肿瘤组织原位植入的肝内转移模型发现显著更少的肝内转移。随后,通过尾静脉注射建立肺转移模型使用体内成像系统进一步证实cSMARCA5的过表达可显著抑制肺转移

 


6   cSMARCA5可以作为miR-17-3pmiR-181b-5p的海绵

    用SMMC-7721Huh7细胞中抗AGO2的抗体进行RNA免疫沉淀(RIPcSMARCA5AGO2抗体显著富集。这一结果表明cSMARCA5可能作为一个AGO2miRNA的结合平台。使用miRanda miRNA靶标预测工具找到65个可能与cSMARCA5结合的潜在miRNA。其中29个在人HCCANL中表达,结合circRIP,使用特异性针对cSMARCA5的探针发现cSMARCA5miR-17-3pmiR-181b-5p的特异性富集使用这两种miRNA进行荧光素酶测定生物素偶联的miR-17-3pmiR-181b-5p模拟物的下拉实验证实了他们之间的相互作用此外,双FISH(荧光原位杂交)测定表明cSMARCA5和这两种miRNA的共定位。

 


7  cSMARCA5通过miR-17-3p/miR-181b-5p-TIMP3通路抑制HCC的生长和转移

    分别过表达miR-17-3pmiR-181b-5p模拟物,TIMP3下调。cSMARCA5过表达时TIMP3是最显著上调cSMARCA5敲低时最明显地下调。我们观察到外源miR-17-3p或(和)miR-181b-5p可显著抑制TIMP3的表达,并且在cSMARCA5过表达后抑制被抑制。CCK-8测定Transwell迁移测定显示miR-17-3p或(和)miR-181b-5p可以促进HCC细胞的生长和转移,并且这种作用可以被过表达的cSMARCA5阻断。此外,TIMP3mRNA水平下调并且与HCC组织中cSMARCA5的表达正相关。总之,结果表明cSMARCA5至少部分地通过miR-17-3p/miR-181b-5p-TIMP3通路抑制HCC的生长和转移

 


讨 论

    我们的研究表明,circRNA可能抑制HCC的生长和转移,并作为肝切除术后肝细胞癌患者的预后生物标志物。此外,在HCC中初步证实了DHX9-cSMARCA5-miR-17-3p/miR-181b-5p-TIMP3通路的调节作用。我们的研究结果为进一步的肝癌中circRNA的功能,诊断和治疗研究奠定了基础。


    上海生因生物专业提供基因组测序、微生物测序、转录组测序(RNAseq),高通量测序数据标准分析、个性化分析,各类图表绘制,及GEOTCGA数据挖掘服务。有需要的联系我们。


微信扫描二维码关注公众号回复数字 “1811081” 下载文献原文及译文


其他相关文献解读

文献解读:转录因子 --> circRNA表达 --> 吸附miRNA --> 促进靶基因表达 --> 上皮-间质转化

文献解读:circRNA翻译蛋白质,并抑制肿瘤进展

文献解读:circAGO2通过HuR阻止AGO2-miRNA复合物的形成来促进癌症进展

文献解读:circRNA抢mRNA饭碗了?

文献解读:从miRNA入手寻找ceRNA机制分子circRNA(二)

文献解读:从miRNA入手寻找ceRNA机制分子circ/lncRNA

文献解读:首次:体外合成circRNA海绵吸附miRNA治疗癌症

返回上一步
打印此页
在线咨询
咨询QQ咨询QQ
咨询电话:
400-966-5216

请扫描二维码添加客服微信

公众号

[向上]