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cell-free样品
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cell-free样品
细胞样品 组织样品 血液样品 cell-free样品 RNA提取
一、血清样品
1、采血后，轻轻将全血滴入洁净的EP管或者离心管；
2、4℃静置 3~4 h，可见血块析出；
3、5000 rpm，4℃离心 10 min，可见淡黄色血清，取出上清后可再3000 rpm，4℃离心 10 min；以最大程度保证血清质量；
4、将血清分装，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输。
二、血浆样品
1、用采血针和抗凝管（含 EDTA 或柠檬酸钠）抽取全血，混匀；
2、4℃静置 3~4 h，5000 rpm，4℃离心5 min，取上清即为血浆；
3、可将血浆分装，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输。
三、细胞上清液样品
1、培养皿的细胞汇合率达到 80%~90%；
2、把原有培养基吸掉，加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞）进行消化；
3、细胞变圆后加入等体积的含正常血清培养基终止消化；
4、用移液枪吹打细胞，使细胞悬浮；1100rpm，离心5min；
5、吸掉上清液，用无 exosome 血清的培养基清洗细胞一次； 1100rpm，离心5min ；
6、吸掉上清液，加入无 exosome 血清的培养基，悬浮细胞；
7、根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中（收集上清时细胞汇合率为 60%~80%），培养48h~72h 后，收集细胞上清；
8、2000 rpm，离心10min，然后10000 rpm，离心30min，去除细胞或者细胞碎片，取上清；
9、分装，液氮速冻，-80℃保存。
四、注意事项
1、送样量：血清/血浆＞4ml，细胞培养上清液＞10ml。
2、血浆样品不能用肝素抗凝，会影响total RNA的抽提效果。
