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细胞样品
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一、贴壁细胞的保存
1、贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养基，按照每 10cm2生长表面积加入 1ml Trizol 试剂，在旋涡震荡器上混匀直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于 Trizol 中形成清亮不粘稠的液体。
2、放入干冰或-80℃冰箱中保存。
二、悬浮细胞的保存
1、悬浮细胞培养诱导结束后，将细胞悬液以 1200r/min 离心 5min，去除上清培养液。
2、按照每 5×106 细胞加入 1ml Trizol 试剂，在旋涡震荡器上混匀直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于 Trizol 中形成清亮不粘稠的液体。
3、放入干冰或-80℃冰箱中保存。
三、RNA提取
1、组织样品，每 100mg 组织加入 1ml Trizol，用液氮研磨或采用电动匀浆器充分打碎组织块）。细胞则根据其生长类型（贴壁、悬浮）加入相应量的 Trizol。
2、每 1ml 用于抽提的 Trizol 加入 200μl 的氯仿，上下颠倒充分混匀 1min 左右，室温静置 5 min。
3、 4℃， 12,000rpm 离心 15 min。 (optional)总 RNA 的纯化（ RNeasy Kit）通常在使用 Trizol 法抽提组织总 RNA时，因为方法的限制，造成总 RNA 的纯度降低。所以建议使用 QIAGEN RNeasy Kit 进一步的纯化。
4、取总 RNA≤100μg 溶解于 100μl RNase-free 的水中，再加入 350μl Buffer RLT 并充分混匀。
5、加入 250μl 无水乙醇， Tip 头充分混匀。
7、吸取 500μl Buffer RPE 到 RNeasy mini 柱子内，≥8000g 离心洗涤 15-30sec，弃去滤过液，再用 500μl Buffer RPE在≥8000g 离心洗涤 2min，弃去滤过液和 2ml 的套管，将 RNeasy mini 柱子转入一新的 1.5 ml Eppendorf 管中。
8、吸取 40 μlRNase free 的水，≥8000g 离心洗脱 1 min。
9、重复步骤 5 一次。
10、测定 OD 值（通常 OD 数值在 1.8-2.1 之间），并做进一步的 RNA 质量检测。
