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RNA提取

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        Total RNA 抽提( Trizol 法)

       1、组织样品,每 100mg 组织加入 1ml Trizol,用液氮研磨或采用电动匀浆器充分打碎组织块)。细胞则根据其生长类型(贴壁、悬浮)加入相应量的 Trizol。
       2、每 1ml 用于抽提的 Trizol 加入 200μl 的氯仿,上下颠倒充分混匀 1min 左右,室温静置 5 min。
       3、 4℃, 12,000rpm 离心 15 min。 (optional)总 RNA 的纯化( RNeasy Kit)通常在使用 Trizol 法抽提组织总 RNA时,因为方法的限制,造成总 RNA 的纯度降低。所以建议使用 QIAGEN RNeasy Kit 进一步的纯化。
详细操作原理和方法见 Rneasy Mini Protocol for RNA Cleanup
       1) 取总 RNA≤100μg 溶解于 100μl RNase-free 的水中,再加入 350μl Buffer RLT 并充分混匀。
       2) 加入 250μl 无水乙醇, Tip 头充分混匀。
       3) 将共计 700μl 含总 RNA 的溶液转入套在 2ml 离心管内的 RNeasy mini 柱子内,≥8000g 离心 15-30sec,弃去
滤过液。
       4)吸取 500μl Buffer RPE 到 RNeasy mini 柱子内,≥8000g 离心洗涤 15-30sec,弃去滤过液,再用 500μl Buffer RPE在≥8000g 离心洗涤 2min,弃去滤过液和 2ml 的套管,将 RNeasy mini 柱子转入一新的 1.5 ml Eppendorf 管中。

       5) 吸取 40 μlRNase free 的水,≥8000g 离心洗脱 1 min。

       6) 重复步骤 5 一次。

       7) 测定 OD 值(通常 OD 数值在 1.8-2.1 之间),并做进一步的 RNA 质量检测。


       Totaol RNA提取注意事项

       1、用于 RNA 提取的试剂及其他物品必须为 RNase-free 的,并且在洁净、 不通风的环境中进行实验。

       2、客户应当选用 Trizol 或 RNeasy 等自己熟悉的或公认可以得到良好实验结果的提取方法进行总 RNA 的提取。
       3、可以根据实际需要选择 RNA 的保存方法:需要长期保存 RNA 保存于 75%乙醇中;无需长期保存的 RNA 样本保存于 RNase free 的双蒸水或 Elution buffer 中。
       4、建议客户送样时提供保存于 RNase free 的双蒸水或 Elution buffer 中的 RNA 样本。
       5、建议客户送样时提供 RNA 样本的电泳图谱以及相关 OD 值等实验数据。
       6、 RNA 样本的保存介质请务必在样本信息登记单上加以说明。
       7、 RNA 样本完全干燥后很难溶于水,因此不要提供干燥状态的 RNA 样本。
       8、样本到达本公司后,技术服务平台将在规定的工作日内进行质检。
       9、经质检证明 RNA 样本无法继续实验时,市场部将及时与客户联系,协商进一步处理事宜。由于中间环节中不确定因素的存在, RNA 样本的质量以我公司质检部检测得到的数据为准!
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